CHIR-99021(CT99021)盐酸

CHIR-99021(CT99021)盐酸名称

中文名：CHIR-99021一盐酸盐
英文名：CHIR-99021monohydrochloride
英文别名：更多

CHIR-99021(CT99021)盐酸生物活性

描述：CHIR-99021(CT99021)是一个GSK-3α/β的抑制剂。
相关类别：信号通路>>自噬>>自噬研究领域>>癌症
靶点：

GSK-3β:6.7nM(IC50)

GSK-3α:10nM(IC50)

cdc2:8800nM(IC50)

体外研究：CHIR99021抑制人GSK-3β,Ki值为9.8nM[1]。CHIR99021是一种小有机分子,通过竞争其ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶检测显示CHIR99021特异性抑制GSK3β(IC50=~5nM)和GSK3α(IC50=~10nM),对其他激酶的影响很小[2]。在CHIR-99021存在下,ES-D3细胞的存活率在2.5μM时降低24.7％,在5μM时降低56.3％,在7.5μM时降低61.9％,在10μMCHIR-99021时降低69.2％,IC50为4.9μM[3]。
体内研究：在ZDF大鼠中,单次口服剂量的CHIR99021(16mg/kg或48mg/kg)迅速降低血浆葡萄糖,给药后3-4小时最大降低近150mg/dl[1]。在照射前4小时给予CHIR99021(2mg/kg)一次,在14.5Gy腹部照射(ABI)后显着提高存活率。CHIR99021处理显着阻断了隐窝细胞凋亡和p-H2AX+细胞的积累,并改善了隐窝再生和绒毛高度。CHIR99021治疗通过阻断细胞凋亡来增加Lgr5+细胞存活率,并且有效地防止Olfm4,Lgr5和CD44的减少早在4小时[4]。
激酶实验：通过使用其His或Glu标签从SF9细胞中纯化激酶。纯化Glu标记的蛋白质，纯化His标记的蛋白质。激酶测定在96孔板中用适当的肽底物在300μL反应缓冲液中进行（50mMTris-HCl，pH7.5,10mMMgCl2,1mMEGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM的变化）NaF和0.01％牛血清白蛋白）。肽的Km值为1至100μM。将CHIR99021或CHIRGSKIA加入3.5μLMe2SO中，然后加入ATP至终浓度为1μM。温育后，将三份100μL等分试样转移至含有100μL/孔50μMATP和20mMEDTA的Combiplate8平板。1小时后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，30分钟后在闪烁计数器中计数。所有步骤均为室温。抑制百分比计算为100×（抑制剂-无酶对照）/（Me2SO对照-无酶对照）[2]。
细胞实验：使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力;这种减少与细胞活力的丧失相关。将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。所有测试条件一式三份进行分析[3]。
动物实验：大鼠[1]制备重量<140g的雄性SpragueDawley大鼠的原代肝细胞，并在分离后1-3小时使用。将等份的1×106个细胞在1mLDMEM/F12培养基加0.2％BSA和CHIR99021（口服16或48mg/kg）或对照中在12孔板中在低速振荡器上于37℃孵育30分钟。在富含CO2的气氛中，通过离心收集并在缓冲液A加0.01％NP40中冷冻/解冻裂解;再次进行GS测定。小鼠[4]使用6-10周龄的小鼠。对C57BL/6背景（F10）和Lgr5-EGFP（Lgr5-EGFP-IRES-creERT2）小鼠的PUMA+/+和PUMA-/-同窝小鼠进行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。在放射前4小时腹膜内（ip）注射2mg/kgCHIR99021或在放射前28小时和1小时/1mgSB415286注射小鼠。处死小鼠以收集小肠用于组织学分析和蛋白质印迹。在处死前，所有小鼠腹膜内注射100mg/kgBrdU。
参考文献：

[1].RingDB,etal.Selectiveglycogensynthasekinase3inhibitorspotentiateinsulinactivationofglucosetransportandutilizationinvitroandinvivo.Diabetes.2003Mar;52(3):588-95.

[2].BennettCN,etal.RegulationofWntsignalingduringadipogenesis.JBiolChem.2002Aug23;277(34):30998-1004.

[3].NaujokO,etal.CytotoxicityandactivationoftheWnt/beta-cateninpathwayinmouseembryonicstemcellstreatedwithfourGSK3inhibitors.BMCResNotes.2014Apr29;7:273.

[4].WangX,etal.Pharmacologicallyblockingp53-dependentapoptosisprotectsintestinalstemcellsandmicefromradiation.SciRep.2015Apr10;5:8566.

CHIR-99021(CT99021)盐酸物理化学性质

分子式：C22H19Cl3N8
分子量：501.799
精确质量：500.079834
外观性状：粉末
储存条件：-20℃

CHIR-99021(CT99021)盐酸英文别名

：3-Pyridinecarbonitrile,6-[[2-[[4-(2,4-dichlorophenyl)-5-(4-methyl-1H-imidazol-2-yl)-2-pyrimidinyl]amino]ethyl]amino]-,hydrochloride(1:1)
：MFCD23704170
：6-[(2-{[4-(2,4-Dichlorophenyl)-5-(4-methyl-1H-imidazol-2-yl)-2-pyrimidinyl]amino}ethyl)amino]nicotinonitrilehydrochloride(1:1)
：CHIR-99021(monohydrochloride)

CHIR-99021(CT99021)盐酸重点介绍

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癌症是一种肿瘤性疾病，由身体某部分异常细胞的不受控制的分裂及其随后的局部侵袭和系统性转移至身体其他部位引起。 致癌突变，基因组不稳定性和炎症引发和加速癌细胞的几个标志的获得，例如维持无限生长，抵抗细胞死亡，诱导血管生成，激活侵袭和转移，重新编程细胞代谢和逃避免疫检查点。

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