阿法蒂尼(BIBW2992)

阿法蒂尼(BIBW2992)名称

中文名：阿法替尼
英文名：afatinib
中文别名：N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺|双马来酸阿法替尼
英文别名：更多

阿法蒂尼(BIBW2992)生物活性

描述：Afatinib(BIBW2992)是不可逆的EGFR家族抑制剂,抑制EGFRwt,EGFRL858R,EGFRL858R/T790M和HER2的IC50分别为0.5nM,0.4nM,10nM和14nM。
相关类别：信号通路>>自噬>>自噬信号通路>>JAK/STAT信号通路>>EGFR信号通路>>蛋白酪氨酸激酶>>EGFR研究领域>>癌症
靶点：

EGFR:0.5nM(IC50)

HER2:14nM(IC50)

EGFRL858R:0.4nM(IC50)

EGFRL858R/T790M:10nM(IC50)

体外研究：在无细胞体外激酶测定中,Afatinib(BIBW2992)dimaleate显示出对抗EGFR和HER2的野生型和突变形式的有效活性,类似于吉非替尼对L858REGFR的效力,但对抗吉非替尼抗性的活性约高100倍。L858R-T790MEGFR双突变体,IC50为10nM。此外,BIBW2992与拉帕替尼和卡那替尼相比具有抗HER2的体外效力,IC50为14nM。该评估中最敏感的激酶是lyn,IC50为736nM[1]。Afatinib是这些ErbB家族受体的不可逆抑制剂。食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞系对Afatinib敏感,IC50浓度在较低的微摩尔范围内(孵育48小时：HKESC-1=78nM,HKESC-2=115nM,KYSE510=3.182μM,SLMT-1=4.625μM,EC-1=1.489μM;孵育72小时：HKESC-1=2nM,HKESC-2=2nM,KYSE510=1.090μM,SLMT-1=1.161μM,EC-1=109nM)最大生长抑制超过95％。Afatinib可以剂量和时间依赖的方式强烈诱导HKESC-2和EC-1中的G0/G1细胞周期停滞[2]。
体内研究：一旦治疗开始,阿法替尼(15mg/kg)强烈抑制HKESC-2肿瘤的生长。车辆的平均肿瘤大小和终点处理分别为348±24mm3和108±36mm3,两者之间存在显着差异。显然,在Afatinib给药结束后,肿瘤大小不会在短时间内反弹。在整个治疗过程中体重没有快速变化表明Afatinib的毒性很小,这种药物耐受性良好[2]。
激酶实验：感染后72小时，用HEPEX（20mMHEPESpH7.4,100mMNaCl，10mMβ-甘油磷酸盐，10mM对硝基苯基磷酸盐，30mMNaF，从Sf9生物质中提取EGFR激酶结构域-GST融合蛋白，5mMEDTA，5％甘油，1％TritonX-100,1mMNa3VO4,0.1％SDS，0.5μg/mL胃蛋白酶抑制剂A，抑肽酶20KIU/mL，Leupeptin2μg/mL，苯甲脒1mM，2.5μg/mL3,4-二氯异香豆素，2.5μg/mL反式环氧琥珀酰基-L-亮氨酰-L-酰氨基丁烷和0.002％PMSF）并用于测定IC50值。每个100μL酶反应在50％Me2SO中含有10μLAfatinib（BIBW2992），20μL底物溶液（200mMHEPESpH7.4,50mMMg-acetate，2.5mg/mLpoly（EY），5μg/mLbio-pEY）和20μL酶制剂。通过加入50μL在10mMMgCl2中制备的100μMATP溶液开始酶促反应。测定在室温下进行30分钟，并通过加入50μL终止溶液（在20mMHEPESpH7.4中的250mMEDTA）终止。将100μL转移至链霉抗生物素蛋白包被的微量滴定板，在室温下孵育60分钟后，用200μL洗涤溶液（50mMTris，0.05％Tween20）洗涤板。向孔中加入100μL等份的HRPO标记的抗PY抗体（PY20HAnti-Ptyr：HRP）250ng/mL。孵育60分钟后，将板用200μL洗涤溶液洗涤三次。然后用100μLTMB过氧化物酶溶液（A：B=1：1）显色样品。10分钟后停止反应。将板转移至ELISA读数器并在OD450nm下测量消光。所有数据点一式三份执行[1]。
细胞实验：将人ESCC细胞系EC-1，HKESC1和HKESC2，SLMT1和KYSE510在含有10％胎牛血清（FBS）的RPMI中培养。使用MTT通过比色测定评估细胞毒性。将肿瘤细胞在各孔培养基中的48孔板（每孔3000-8000个细胞）中培养。在细胞铺板后24小时加入完全培养基中的阿法替尼，并在37℃，5％CO2下培养48和72小时。细胞生长抑制表示为用酶标仪在570nm处测量的对照培养物的吸光度百分比，并且通过GraphPadPRISM计算50％的最大生长抑制（IC50）。在每个实验中，对于每种药物浓度（n=3）进行一式三份孔，并且在三个独立实验中重复测定[2]。
动物实验：小鼠[2]使用体重约16-20克的六周龄雌性无胸腺裸鼠（nu/nu）。通过将HKESC-2（重悬于50μLHBSS缓冲液中的6×104细胞）皮下接种到裸鼠的两侧，建立ESCC异种移植物。当肿瘤大小达到4-6mm直径时，它们在治疗（15mg/kg）或载体对照组中随机化。用于治疗的阿法替尼通过在给药前溶解在0.5％甲基纤维素中来制备。通过口服强饲法将药物或媒介物以5天的时间表给予小鼠，加上2天，连续两周。通过用卡尺监测肿瘤大小的变化来评估药物功效。用公式肿瘤体积=（宽度2×长度）/2计算肿瘤体积。
参考文献：

[1].LiD,etal.BIBW2992,anirreversibleEGFR/HER2inhibitorhighlyeffectiveinpreclinicallungcancermodels.Oncogene.2008Aug7;27(34):4702-11.

[2].WongCH,etal.Preclinicalevaluationofafatinib(BIBW2992)inesophagealsquamouscellcarcinoma(ESCC).AmJCancerRes.2015Nov15;5(12):3588-99.

[3].WangXK,etal.AfatinibcircumventsmultidrugresistanceviaduallyinhibitingATPbindingcassettesubfamilyGmember2invitroandinvivo.Oncotarget.2014Dec15;5(23):11971-85.

[4].YoshiokaT,etal.Antitumoractivityofpan-HERinhibitorsinHER2-positivegastriccancer.CancerSci.2018Apr;109(4):1166-1176.

阿法蒂尼(BIBW2992)物理化学性质

密度：1.4±0.1g/cm3
沸点：676.9±55.0°Cat760mmHg
熔点：100-102°C
分子式：C24H25ClFN5O3
分子量：485.938
闪点：363.2±31.5°C
精确质量：485.162994
PSA：88.61000
LogP：3.59
外观性状：灰白色固体
蒸汽压：0.0±2.1mmHgat25°C
折射率：1.668
储存条件：0-10°C;避免加热

阿法蒂尼(BIBW2992)合成线路

：

2-(二甲基氨基)乙醛亚硫酸盐

1413945-87-5

~92%

阿法蒂尼(BIBW2992)

850140-72-6

：文献：BOEHRINGERINGELHEIMINTERNATIONALGMBH;BOEHRINGERINGELHEIMPHARMAGMBHandCO.KGPatent:WO2007/85638A1,2007;Locationinpatent:Page/Pagecolumn23;WO2007/085638A1
：

P-[2-[[4-[(3-氯-…

618061-76-0

二甲氨基乙醛缩二乙醇

3616-56-6

~98%

阿法蒂尼(BIBW2992)

850140-72-6

：文献：RATIOPHARMGMBH;TEVAPHARMACEUTICALSUSA,INC.;GIDWANI,Ramesh,Matioram;HIREMATH,Channaveerayya;YADAV,Manoj,Dalsingar;ALBRECHT,Wolfgang;FISCHER,DirkPatent:WO2012/121764A1,2012;Locationinpatent:Page/Pagecolumn49-50;

阿法蒂尼(BIBW2992)英文别名

：2-Butenamide,N-[4-[(3-chloro-4-fluorophenyl)amino]-7-[[(3S)-tetrahydro-3-furanyl]oxy]-6-quinazolinyl]-4-(dimethylamino)-,(2E)-
：(2E)-N-(4-[(3-chloro-4-fluorophenyl)amino]-7-{[(3S)-tetrahydrofuran-3-yl]oxy}quinazolin-6-yl)-4-(dimethylamino)but-2-enamide
：Afatinib
：Tovok
：Tomtovok
：(2E)-N-{4-[(3-Chloro-4-fluorophenyl)amino]-7-[(3S)-tetrahydro-3-furanyloxy]-6-quinazolinyl}-4-(dimethylamino)-2-butenamide
：BIBW-2992
：(S,E)-N-(4-((3-Chloro-4-fluorophenyl)amino)-7-((tetrahydrofuran-3-yl)oxy)quinazolin-6-yl)-4-(dimethylamino)but-2-enamide
：Gilotrif

阿法蒂尼(BIBW2992)重点介绍

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代谢疾病的定义是一系列相互关联的生理，生化，临床和代谢因素，这些因素直接增加了心血管疾病，2型糖尿病和所有原因死亡率的风险。 相关病症包括高尿酸血症，进展为非酒精性脂肪肝疾病的脂肪肝（特别是并发肥胖），多囊卵巢综合征（女性），勃起功能障碍（男性）和黑棘皮病（acanthosis nigricans）

AFaDiNi(BIBW2992)

阿法蒂尼(BIBW2992)