HPI-4 (Ciliobrevin A)

HPI-4(CiliobrevinA)名称

中文名：CiliobrevinA.
英文名：3-(2,4-dichiorophenyl)-3-oxo-2-(4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2(1H)ylidene)propanenitrile
英文别名：更多

HPI-4(CiliobrevinA)生物活性

描述：CiliobrevinA是一种Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂,平均抑制浓度(50)值小于10μM。
相关类别：信号通路>>干细胞及Wnt通路>>Hedgehog研究领域>>癌症
靶点：

IC50:<10μM(Hedgehog)[1]

体外研究：CiliobrevinA(HPI-4)也可以防止Shh刺激后FLAG-Gli2全长/阻遏物比率增加,但HPI-2和HPI-3没有显着影响。CiliobrevinA降低了这些细胞中FLAG-Gli1的稳定性,揭示了这种小分子可以抑制Hh靶基因表达的另一种机制,而HPI-2或HPI-3对FLAG-Gli1水平都没有任何显着影响。CiliobrevinA以与其对总FLAG-Gli2水平的影响不成比例的方式增加FLAG-Gli2的纤毛水平。此外,用CiliobrevinA培养的Shh-EGFPFLAG-Gli2细胞具有截短的初级纤毛,并且在显着部分的CiliobrevinA处理的细胞中不存在该细胞器。CiliobrevinA还扰乱Shh-LIGHT2FLAG-Gli1细胞中的初级纤毛形成,并促进FLAG-Gli1在该细胞器远端的积聚。通过组蛋白H3磷酸化(pH3)水平测量,CiliobrevinA显着抑制这些神经元祖细胞的增殖,并降低CGNP中细胞周期蛋白D1蛋白和Gli1,Gli2和N-Myc转录物的细胞水平。CiliobrevinA可以阻断表达SmoM2的CGNPs的增殖,并且对于缺乏Su(fu)功能的CGNPs应该同样有效,而Smo抑制剂Cyclopamine对任何致癌病变均无效[1]。
激酶实验：使用基于CMV启动子的含有SV40起点的Smo-Myc3表达构建体（在C末端含有三个连续Myc表位的鼠Smo），用BODIPY-环巴胺和Smo过表达HEK293T细胞进行Smo结合测定。将HEK293T细胞接种到8孔腔盖玻片（80,000细胞/孔）中，并在含有10％FBS，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素的DMEM中培养。培养细胞直至它们达到55-65％汇合（14-18h），之后用Smo-Myc3表达构建体和Transit-LT1转染它们。转染后24小时，用PBS洗涤细胞，并在含有0.5％FBS，5nMBODIPY-环巴胺和各种浓度的环巴胺或单个HPI的DMEM中培养。30分钟后，向每个孔中加入10μMHoescht33342，并将HPI与细胞一起温育另外30分钟。然后用PBS缓冲液洗涤细胞两次，用含有0.5％FBS的无酚红DMEM洗涤一次，并立即使用DMI6000B复合显微镜成像。使用具有75像素的滚球尺寸的ImageJ软件对图像进行背景减去，然后使用Metamorph软件确定BODIPY-环巴胺强度。将直径为300像素的圆形区域放置在包含均匀汇合的细胞的区域上，并且使用来自四个独立图像的大约20个区域的像素强度来确定每个实验条件的平均BODIPY-环巴胺水平[1]。
细胞实验：将NIH3T3细胞接种到含有聚D-赖氨酸包被的12-mm玻璃盖玻片的24孔板（40,000细胞/孔）中，并在含有10％CS，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素的DMEM中培养，直至它们达到85-90％的融合度。将培养基更换为含有0.5％CS，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素的DMEM，并将细胞再培养12小时。然后用DMSO，3μM环巴胺，15μMHPI-1,20μMHPI-2,30μMHPI-3或30μMCiliobrevinA处理细胞。将Shh-N条件培养基加入适当的孔中。最终浓度为5％。12小时后，将细胞在室温下在4％多聚甲醛中固定10分钟，用PBS洗涤三次，用含有0.1％TritonX-100的PBS透化1分钟，再用PBS洗涤三次，然后用PBS封闭。含有1％正常山羊血清的PBS3小时。然后将盖玻片用小鼠抗N-乙酰化-α-微管蛋白（在封闭缓冲液中1：1,000）和兔抗Smo抗体（6）（在封闭缓冲液中1：2,000稀释）在室温下处理2小时并洗涤用PBS3×5分钟。接下来将盖玻片与AlexaFluor594-缀合的山羊抗小鼠IgG和AlexaFluor488-缀合的驴抗兔IgG抗体（在封闭缓冲液中1：1,000稀释）在室温下孵育1小时。用PBS洗涤并用4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）孵育5分钟后，使用ProlongGold固定样品，并用倒置的LeicaDMIRE2激光扫描共聚焦显微镜成像[1]。
参考文献：

[1].HymanJM,etal.Small-moleculeinhibitorsrevealmultiplestrategiesforHedgehogpathwayblockade.ProcNatlAcadSciUSA.2009Aug18;106(33):14132-7.

HPI-4(CiliobrevinA)物理化学性质

分子式：C17H9Cl2N3O2
分子量：358.17800
精确质量：357.00700
PSA：89.51000
LogP：3.00128
外观性状：粉末
储存条件：-20℃

HPI-4(CiliobrevinA)安全信息

符号：
GHS07,GHS09
信号词：Warning
危害声明：H302-H410
警示性声明：P273-P501
危险品运输编码：UN30779/PGIII

HPI-4(CiliobrevinA)文献5

更多文献：Effectsofthedyneininhibitorciliobrevinontheflagellarmotilityofseaurchinspermatozoa.

Cytoskeleton(Hoboken.)72,182-92,(2015)

Ciliobrevinhasrecentlybeenfoundtobeamembrane-permeableinhibitorthatisspecifictoAAA+molecularmotorssuchascytoplasmicdyneins.Inthisstudy,weinvestigatedhowciliobrevininhibited…

：
：Thefateoftheprimaryciliumduringmyofibroblasttransition.

Mol.Biol.Cell25(5),643-57,(2014)

Myofibroblasts,theculpritoforganfibrosis,canoriginatefrommesenchymalandepithelialprecursorsthroughfibroblast-myofibroblastandepithelial-myofibroblasttransition(EMyT).Becausecertain…

：
：PolarityproteinPar3controlsB-cellreceptordynamicsandantigenextractionattheimmunesynapse.

Mol.Biol.Cell26(7),1273-85,(2015)

B-cellreceptor(BCR)engagementwithsurface-tetheredantigensleadstotheformationofanimmunesynapse,whichfacilitatesantigenuptakeforpresentationtoT-lymphocytes.Antigeninternalization…

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HPI-4(CiliobrevinA)英文别名

：CiliobrevinA
：HPI-4

HPI-4 (Ciliobrevin A)重点介绍

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心血管疾病（CVD）是全世界死亡和残疾的主要原因。 CVD包括心脏疾病，脑血管疾病和血管疾病。 由动脉粥样硬化引起的冠心病和脑血管疾病是最常见的心血管疾病。 其他不太常见的CVD形式包括风湿性心脏病和先天性心脏病。 通过减少烟草使用，缺乏身体活动和不健康饮食等行为风险因素，可以预防大部分心血管疾病。

HPI-4(CiliobrevinA)

HPI-4 (Ciliobrevin A)