CHIR-99021三盐酸盐

CHIR-99021三盐酸盐名称

中文名：CHIR-99021三盐酸盐
英文名：6-[(2-{[4-(2,4-Dichlorophenyl)-5-(4-methyl-1H-imidazol-2-yl)-2-pyrimidinyl]amino}ethyl)amino]nicotinonitriletrihydrochloride
英文别名：更多

CHIR-99021三盐酸盐生物活性

描述：CHIR-99021(CT99021)是一个GSK-3α/β的抑制剂。
相关类别：信号通路>>自噬>>自噬信号通路>>PI3K/Akt/mTOR信号通路>>GSK-3信号通路>>干细胞及Wnt通路>>GSK-3研究领域>>癌症
靶点：

GSK-3β:6.7nM(IC50)

GSK-3α:10nM(IC50)

cdc2:8800nM(IC50)

体外研究：CHIR99021抑制人GSK-3β,Ki值为9.8nM[1]。CHIR99021是一种小有机分子,通过竞争其ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶检测显示CHIR99021特异性抑制GSK3β(IC50=~5nM)和GSK3α(IC50=~10nM),对其他激酶的影响很小[2]。在CHIR-99021存在下,ES-D3细胞的存活率在2.5μM时降低24.7％,在5μM时降低56.3％,在7.5μM时降低61.9％,在10μMCHIR-99021时降低69.2％,IC50为4.9μM[3]。
体内研究：在ZDF大鼠中,单次口服剂量的CHIR99021(16mg/kg或48mg/kg)迅速降低血浆葡萄糖,给药后3-4小时最大降低近150mg/dl[1]。在照射前4小时给予CHIR99021(2mg/kg)一次,在14.5Gy腹部照射(ABI)后显着提高存活率。CHIR99021处理显着阻断了隐窝细胞凋亡和p-H2AX+细胞的积累,并改善了隐窝再生和绒毛高度。CHIR99021治疗通过阻断细胞凋亡来增加Lgr5+细胞存活率,并且有效地防止Olfm4,Lgr5和CD44的减少早在4小时[4]。
激酶实验：通过使用其His或Glu标签从SF9细胞中纯化激酶。纯化Glu标记的蛋白质，纯化His标记的蛋白质。激酶测定在96孔板中用适当的肽底物在300μL反应缓冲液中进行（50mMTris-HCl，pH7.5,10mMMgCl2,1mMEGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM的变化）NaF和0.01％牛血清白蛋白）。肽的Km值为1至100μM。将CHIR99021或CHIRGSKIA加入3.5μLMe2SO中，然后加入ATP至终浓度为1μM。温育后，将三份100μL等分试样转移至含有100μL/孔50μMATP和20mMEDTA的Combiplate8平板。1小时后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，30分钟后在闪烁计数器中计数。所有步骤均为室温。抑制百分比计算为100×（抑制剂-无酶对照）/（Me2SO对照-无酶对照）[2]。
细胞实验：使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力;这种减少与细胞活力的丧失相关。将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。所有测试条件一式三份进行分析[3]。
动物实验：大鼠[1]制备重量<140g的雄性SpragueDawley大鼠的原代肝细胞，并在分离后1-3小时使用。将等份的1×106个细胞在1mLDMEM/F12培养基加0.2％BSA和CHIR99021（口服16或48mg/kg）或对照中在12孔板中在低速振荡器上于37℃孵育30分钟。在富含CO2的气氛中，通过离心收集并在缓冲液A加0.01％NP40中冷冻/解冻裂解;再次进行GS测定。小鼠[4]使用6-10周龄的小鼠。对C57BL/6背景（F10）和Lgr5-EGFP（Lgr5-EGFP-IRES-creERT2）小鼠的PUMA+/+和PUMA-/-同窝小鼠进行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。在放射前4小时腹膜内（ip）注射2mg/kgCHIR99021或在放射前28小时和1小时/1mgSB415286注射小鼠。处死小鼠以收集小肠用于组织学分析和蛋白质印迹。在处死前，所有小鼠腹膜内注射100mg/kgBrdU。
参考文献：

[1].RingDB,etal.Selectiveglycogensynthasekinase3inhibitorspotentiateinsulinactivationofglucosetransportandutilizationinvitroandinvivo.Diabetes.2003Mar;52(3):588-95.

[2].BennettCN,etal.RegulationofWntsignalingduringadipogenesis.JBiolChem.2002Aug23;277(34):30998-1004.

[3].NaujokO,etal.CytotoxicityandactivationoftheWnt/beta-cateninpathwayinmouseembryonicstemcellstreatedwithfourGSK3inhibitors.BMCResNotes.2014Apr29;7:273.

[4].WangX,etal.Pharmacologicallyblockingp53-dependentapoptosisprotectsintestinalstemcellsandmicefromradiation.SciRep.2015Apr10;5:8566.

CHIR-99021三盐酸盐物理化学性质

分子式：C22H21Cl5N8
分子量：574.721
精确质量：572.033203
储存条件：2-8℃

CHIR-99021三盐酸盐英文别名

：6-[(2-{[4-(2,4-Dichlorophenyl)-5-(4-methyl-1H-imidazol-2-yl)-2-pyrimidinyl]amino}ethyl)amino]nicotinonitriletrihydrochloride
：3-Pyridinecarbonitrile,6-[[2-[[4-(2,4-dichlorophenyl)-5-(4-methyl-1H-imidazol-2-yl)-2-pyrimidinyl]amino]ethyl]amino]-,hydrochloride(1:3)
：CHIR-99021(trihydrochloride)

CHIR-99021三盐酸盐重点介绍

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免疫系统疾病引起的疾病分为两大类：免疫缺陷和自身免疫。 免疫疗法也经常用于免疫抑制（例如HIV患者）和患有其他免疫缺陷或自身免疫疾病的人。

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